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          技術支持

          魚羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒說明書

          更新時間:2016-12-23   點擊次數:2674次

          本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷。

           

          魚羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒說明書

          供應商:上海遠慕生物科技有限公司能

          【試劑盒用途】
          定量牛血清、血漿及相關液體樣本中羥脯氨酸(Hyp)的含量

          【檢測原理】
          本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被羥脯氨酸(Hyp)透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中羥脯氨酸(Hyp)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中羥脯氨酸(Hyp)含量。

          【魚羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒 試劑盒組成】

          1

           

          酶標包被板

          12孔×8條

          7

          底物夜A

          6mL

          2

           

          標準品:200ng/ml

          0.6mL

          8

          底物夜B

          6mL

          3

           

          20倍濃縮洗滌液

          20mL

          9

          終止液

          6mL

          4

           

          標準品稀釋液

          6mL

          10

          說明書

          1份

          5

           

          樣本稀釋液

          6mL

          11

          封板膜

          1張

          6

           

          酶標試劑

          6mL

          12

          密封袋

          1個

          備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml

          魚羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒

          【需要而未提供的試劑和器材】
          1、37℃恒溫箱
          2、 標準規格酶標儀
          3、 精密移液器及一次性吸頭
          4、 蒸餾水
          5、 一次性試管
          6、 吸水紙

          【試劑盒操作步驟】
          1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
          2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
          3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
          4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
          5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
          6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
          7、溫育:重復4的操作。
          8、洗板:重復5的操作。
          9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。
          10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
          11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
          12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

          【樣本要求】
          1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
          2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
          3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。

          【注意事項】
          1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
          2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
          3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
          4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
          5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.1-200ng/ml范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
          6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
          7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
          8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
          9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

          【操作程序總結】
          準備試劑,樣品和標準品 
          加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
          洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
          洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
          加入終止液
          15分鐘之內讀OD值

          【ELISA試劑盒檢測范圍】
          0.1-200ng/ml

          【試劑盒規格】
          96T/盒、48T/盒

          【試劑盒貯藏】
          2-8℃,避光防潮保存。

          【有效期】
          6個月

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