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          技術支持

          BA/F3細胞培養說明書

          更新時間:2016-12-26   點擊次數:4647次

           

          一、細胞培養條件   
          細胞英文名稱BA/F3細胞中文名稱 小鼠原B細胞
          形態特性 生長特性懸浮
          培養體系1640+10%FBS + 10ng/ml IL-3
          傳代方法1:2 - 1:4傳代情況2~3天換液/傳代
          凍存條件90%FBS+10%DMSO支原體檢測陰性

          二、細胞收到后處理

              細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿*培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml*培養液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養步驟。

          三、細胞培養步驟

              1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過ye(或將細胞懸液加入6cm皿中,加入約6ml培養基,培養過ye)。第二天換液并檢查細胞密度。

              2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

              1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

              1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

              2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

              3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

              4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

              2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

              方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

              方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

              3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心5分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

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