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          技術支持

          血清使用效果千差萬別,是哪里出錯了?

          更新時間:2022-11-10   點擊次數:540次

          剛買來的細胞,前幾代養著還行,這越養怎么狀態越差?后面的實驗可怎么辦?經?!革曫B」細胞的小伙伴,應該都遇到或聽說過上述這些情況。影響細胞狀態的潛在因素有很多,血清就是其中之一。

          血清對于細胞實驗的重要性毋庸置疑:提供細胞生長增殖所需的營養物質、提供結合蛋白、幫助細胞貼壁、提供蛋白酶抑制劑、調節培養體系理化特性等等功能。因此,可以這樣認為:血清品質的優劣,一定程度上決定了細胞生長狀態的好壞。

          很多從業者在挑選血清的時候,只關注到品牌、產地,甚至會哪家打折買哪家,忽略了血清的檢測指標、批次以及解凍儲存情況。那么,這些細節究竟有何玄/機?下面我們將目光鎖定在這三個方面,揭秘其在細胞培養過程中,導致血清使用效果出現差異的原因,希望可以給各位從事細胞培養相關工作的小伙伴,提供幫助!

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          一、檢測指標

          血清對于細胞培養很重要,要保證血清質量,需要有嚴格的質控,包括從外觀到理化性質、細胞增殖試驗和微生物檢查,制定一系列的標準,以及出廠產品能符合這些標準。

          以胎牛血清為例,優質的特級胎牛血清,外觀應是淡棕色至橙色透明液體,無顆粒物沉淀;PH 在 6.7-8.2 之間;滲透壓在 260-340mosm/kg 之間;血紅蛋白含量小于 20 mg/dL;總蛋白含量在 30-50 g/L;白蛋白含量在 14-34 g/L;α、β、γ 球蛋白含量則以實際測量為準;IgG 應小于 250 μg/mL;內毒素含量應小于 10EU/mL。

          這些指標直接關系到所培養細胞質量的高低。其中的典型代表就是內毒素。健康的胎牛血本身是不含有內毒素的,但是由于采集過程,運輸環境,生產工藝等多種因素,商業化的成品胎牛血清不可避免地會檢出內毒素。我們都知道,內毒素參與細胞的衰老、凋亡等進程。長期用內毒素含量高的血清培養細胞,更容易影響細胞正常的生理生化功能,令細胞不知不覺進入「亞健康」的狀態。細胞健康,實驗結果才能更準確;細胞「萎靡不振」,實驗結果也容易隨之產生偏差。

          因此,在挑選血清、查看檢測報告的時候,應重點關注內毒素這一項,選擇內毒素含量低的血清。以 Ausbian 特級胎牛血清為例:經過檢測,其內毒素含量穩定小于 3EU/mL,一些批次甚至小于 1.0 EU/mL!「飲食干凈」,細胞狀態更健康!

          二、血清批次

          每年全球產的胎牛血清的總量是有限的。正常情況下,胎牛血清是通過剖腹產 5-8 月齡的牛胚胎,采用心臟穿刺采血的方式,經一系列加工處理后得到的。一次采血最多也就 1 到 2 瓶胎牛血清,所以它本身就要比其他血清更為稀少珍貴。

          再大的血清制造商,每一批的血清產量都是有限的。不同飼養條件下、不同品種,相同流水線上操作的不同員工,都會導致同一品牌不同批次的血清略有差別。不同批號的血清在同一個實驗中混用,很難保證細胞不會因為「飲食」改變而耍耍實驗數據不穩定這樣的「小脾氣」。

          那么,該怎樣解決這一難題?每次換血清都從頭驗證?還是和之前的血清混合使用?最行之有效的方法,就挑選一個安全可靠、貨源充足、產品可溯源的品牌!

          遠慕提供Ausbian 特級胎牛血清,近二十年服務過千萬細胞培養用戶,澳洲血源,原裝/進口,供貨穩定,每個批次產量 800-2000 升,保證大多數項目兩年不需換批次。不僅如此,Ausbian 特級胎牛血清可提供多批次平行供應,會根據用戶的不同需求,挑選符合實驗需求的血清,盡可能減少血清因批次不同而產生的實驗誤差。

          三、血清的解凍與儲存

          剛到貨的血清應該怎樣儲存?血清到底要怎樣解凍才能保證活性?血清在 4℃ 冰箱能放多久?這些細節也會影響血清的使用效果。

          常規儲存

          首先,剛到貨的血清,趁著它還未融化,趕緊放進-20℃ 冰箱中,避免反復凍融。當然,如果你的課題組不差錢,-80℃ 冰箱空間充足,把血清儲存進去也是沒有問題的。

          再來說說血清的解凍。很多從業者都習慣將血清從-20℃/-80℃ 取出后,直接丟在 4℃ 冰箱甚至是室溫環境下過夜解凍。這種方法雖然看似方便省心,實則有一定的潛在風險。

          科學解凍

          我們都知道,在血清這種混合物中,融化速度:蛋白質等干物質 > 水這類溶劑,所以蛋白質會率/先溶解析出,而水還是結成冰的狀態,導致瓶子中間會出現一根透明的冰柱,而周圍則會呈現上黃下紅的分層渾濁液的狀態,在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題,影響細胞生長。

          更重要的一點是,血清中珍貴的生長因子等活性物質,它們在解凍過程中,有著與細胞復蘇類似的經歷,都需要快速解凍才能盡可能保留生物活性。顯然,4℃ 過夜這樣的長時間處理,很有可能會導致一部分「營養成分」的損失,影響細胞生長。

          所以,為了更好地保留血清中的活性成分,使細胞培養更穩定,我們推薦使用三步法溶解。如果是儲存在-80℃ 的血清,則需提前幾天先轉移至-20℃ 冰箱中(至少 24 小時),再使用三步法溶解,避免溫差過大使血清失活。

          需要特別提醒的是,此方法國際通用,適用于所有培養基,在水浴過程中,血清的平面要完/全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身,使血清混勻,但搖動中盡量不要產生泡沫!

          徹/底解凍血清后,可以根據實驗需求,將其分裝,保證每一份夠一次使用量即可,比如:25 ml/管、50 ml/管等。密封好后趕緊放回-20℃ 冰箱繼續儲存。需要配制培養基的時候,再從-20℃ 冰箱中取出一管來解凍使用(最好能全部配成培養基,不要有剩余),可以有效避免反復凍融的問題(遵循現用現配、現配現解凍的原則)。配好的培養基可以放到 4℃ 冰箱進行儲存。

          看到這里,問題又來了,配好的培養基,或者剩下的那一點點血清,能在 4℃ 冰箱里放多久呢?先給出我們認為比較合理的答案,再來解釋原因:7 天

          一般情況下,已經解凍的血清,無論是配成完/全培養基還是在冰箱里備用,都不要超過一周(7 天),原因也很簡單,存放太久,生長因子等物質容易失活,而且比較容易受到污染,影響實驗結果。

          其實,無論是日常使用,還是銷售運輸過程中,血清都忌諱反復凍融,不僅容易析出沉淀,造成細胞污染的假象,給實驗人員造成比不要的困擾,而且在一些對營養需求比較特殊的細胞而言,反復凍融析出大量沉淀的血清,可能不足以供給其營養,導致細胞出現生長不良等狀況。

          因此,選擇一款運輸途中儲存條件有保障的血清,至關重要。Ausbian 特級胎牛血清及其同系列血清產品,出廠后,全程冷鏈運輸,對反復凍融 Say No!

          綜上所述,想要保證細胞狀態、實驗數據的穩定,一款優質的血清必不/可少。遠慕可提供各種合適的特級胎牛血清,詳情關注我們哦!

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