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          技術支持

          質粒純度不高怎么解決?

          更新時間:2023-01-06   點擊次數:607次

            質粒純度不高解決辦法


            1.混有蛋白:不要使用過多菌體。經溶液P1、P2、P3處理,離心后溶液應為澄清的,如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進行下一步驟。


            2. 混有RNA:RNaseA處理不che底,請減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時間。如果溶液P1已保存6個月以上,請在溶液P1中添加RNaseA。


            3. 混有基因組DNA:加入溶液P2和P3后應溫和混勻,如果劇烈振蕩,可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠,無法溫和混勻,請減少菌體用量。細菌培養時間過長會導致細胞和DNA的降解,培養時間不要超過16小時。


            4. P3溶液加入時間過長:P3溶液加入后,放置時間不要太長,否則有可能會產生小片段DNA污染。


            5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在質粒提取過程中降解質粒DNA,影響提取質粒DNA的完整性,最好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌,如DH5α。


            6. 質粒的二聚體和多聚體形式:質粒復制過程中形成的,與宿主菌相關,電泳可檢測出多條條帶,單酶切處理后可變成單一條帶。


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