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          技術支持

          慢病毒包裝的作用和關鍵點說明

          更新時間:2023-01-31   點擊次數:527次

            慢病毒是逆轉錄病毒的一種,它能夠將靶基因導入到一些較難轉染的細胞,如原代細胞等,并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中,從而大大增加了轉染效率,并且能夠在細胞系中穩定表達若干代,可以進行穩轉細胞株的篩選。因為是隨機整合,也有不確定因素,有些公司還能提供定點整合技術,將靶基因定點整合到基因組特定的部位,從而保證其高效表達并且對細胞不產生隨機整合可能產生的傷害。

          QQ圖片20220909145525.jpg

            慢病毒包裝質??商峁┧械霓D錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。

            慢病毒包裝的幾個關鍵點:

            其關鍵點是細胞因素、載體系統(盡量使用成熟的商業化載體系統)、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制(24、48小時的細胞及熒光狀態判斷)、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功)。

            純化后的慢病毒保存方法:慢病毒純化后的病毒用無血清的DMEM保存就可以了,一般放在-80度進行長久保存。如果收集的上清不想立即純化可先放在-80度,等下次收集的一起純化。目的蛋白在包裝細胞中或者滴度測定細胞中會表達的,滴度測定就是根據目的蛋白表達情況來進行操作的。

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