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          技術支持

          溶解多肽的方法及多肽應用的注意點

          更新時間:2023-03-03   點擊次數:353次
           

          多肽的溶解度取決元計算的物理特性。氨基酸可分類為酸性,堿性,極性,非極性,疏水性。多肽有高含量的非極性疏水性氨基酸或極性不帶電荷的氨基酸。建議溶解在有機溶液中(例如:DMF,甲醇,丙醇,異丙醇,DMSO)??傊?,酸性多肽一般溶解于堿性溶液中,而堿性多肽溶解在酸性溶液中。

          氨基酸的屬性

          堿性:Arg,His(H),Lys(K)
          非極性疏水性:Ala(A),Ile(I),Len(L),Met(M),Phe(F),Pro(P),Trp(W),Val(V)
          極性不帶電荷:Asn(N),Cys(C),Glg(G),Gln(Q),Ser(S),Thr(T),Tyr(Y)

          酸性:Asp(D),Glu(E)

          由于多肽的溶解特性取決于其氨基酸成分。在選擇適當的溶劑之前我們建議先查一下多肽的氨基酸序列,

          1、  堿性多肽(堿性氨基酸數量>酸性氨基酸數量)應該先用小量酸性氨基酸溶液(例如:醋酸或三氟醋酸)溶解,然后稀釋劑所需的濃度。制備高濃度的儲存液時,應用80%醋酸溶解多肽。也可用20%醋酸溶解減少醋酸對于檢測系統的不良影響。
          2、  酸性多肽(酸性氨基酸數量>堿性氨基酸數量)應該先用小量堿性氨基酸溶液(例如0.1%氨水,NH4OH),然后用水稀釋到所需的濃度。應該注意,對于含有半胱氨酸(Cysteine)的多肽要避免使用氨水,因為在PH堿性條件下會促使二硫鍵的形成。
          3、  中性或者高度疏水性多肽,含有許多極性不帶電荷的氨基酸或非極性疏水性氨基酸,應該用小量的有機溶劑(例如:DMF,甲醇,丙醇,異丙醇,DMSO)溶解,因為DMSO可形成氨基酸甲風化。
          4、  離液劑(例如尿素,鹽酸胍)有時用來溶解凝聚的多肽,但如有可能應當盡量不用,因為離液劑會干擾多肽的生物學應用。在個別情況下,多肽的溶解時間較長,甚至達幾個小時,在水浴中超聲波打幾分鐘可促使大顆粒多肽的溶解。但是不要加度加熱。含有Trp,Met,Cys的多肽要額外小心避免氧化,應該用無氧的水或還原劑(例如DTT)來溶解。儲藏時,多肽溶液應該分裝后置于-15℃,可以保持穩定幾個月,含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期較短,不宜長期保存。

          多肽在溶解和儲存時,應遵循下列要點:

          1、  多肽的凈重
          在準備多肽的溶液時,應考慮到多肽的凈重問題。研究用多肽的HPLC純度一般達到95%以上,而多肽的固體含量在70-90%范圍內,這是因為多肽含有的其它離子(例如:醋酸/三氟yi酸)和殘余的潮氣。每個批號的多肽含量都記錄在分析數據報告上。

          2、  多肽凍干粉的處置
          *多肽長期保存應放置在-15℃以下。
          *多肽容易吸潮,應先把裝有多肽的瓶放在玻璃器中,至于室溫下平衡溫度,然后才能打開瓶稱量多肽,多肽吸收水分后將影響穩定性使多肽含量減少。
          *從瓶中稱出所需量的多肽后,應立刻將瓶蓋擰緊。

          3、溶解于儲存
          *多肽應溶解在適當的溶液中:酸性多肽應溶解在堿性溶液中,堿性多肽應溶解在酸性溶液中。必要時可用超聲波幫助溶解。
          *多肽含有Trp,Net,Cys應該特別注意免氧化.應該用無氧的水或還原劑.
          *儲存時,多肽溶液應該分裝后置于-15℃以下,多數含有Trp,Net,Cys的多肽半帥期教短,不應長期保存。

           


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