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          技術支持

          實驗室細胞培養被污染的處理方法

          更新時間:2023-07-17   點擊次數:256次

            實驗室細胞培養中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。

            1.細菌污染

            細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據感染菌的種類不同,可能會呈現不同的形狀,培養液一般會變得渾濁、黃色,對細胞生長有明顯影響。

            2.霉菌污染

            正常情況下,培養基在 37℃ 培養箱中培養兩三天,在倒置顯微鏡下仍保持透明,無雜質。一旦出現絮狀雜質,顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物,菌絲明顯。此時,雖然細胞仍在生長,但它們的生命狀態會在長時間后逐漸惡化。

            3.支原體污染

            支原體是隱蔽的污染物,不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象,比如細胞病變和濁度或 pH 值變化(即使在嚴重污染的培養基中),這樣就會導致我們產生錯誤的安全感。而在牛血清中,支原體是最常見的微生物之一。

            4.黑點污染

            黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點,在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養液也不渾濁,一般影響較小,因此細胞仍可使用。通常,黑點污染后,細胞生長良好,運動物體無明顯增加,培養基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養的細胞中也可以發現類似的現象。

            5.真菌污染

            真菌污染后,培養基一般清澈,保持原色。細絲可以在顯微鏡下觀察到。最初,一些真菌類似于死細胞碎片,但其中許多清晰可見,看起來像珊瑚,比較容易區分。此外,它們會慢慢長出細細的黑色細絲,因為它們生長得比較慢,不像細菌那樣容易被發現,一旦發現培養基被污染,它們將很難存活。

            6.原生動物污染

            原生動物污染后,細胞培養基變得輕微渾濁。在顯微鏡下,大量的小點來回移動。雖然此時細胞仍能生長,但繁殖速度減慢,細胞生長狀態不好,邊緣不清,變得不透明。原生動物與細胞形成共生關系。同時,原生動物與細胞競爭營養。這種共生現象非常普遍,但以細胞為主,因為原生動物的數量相對較少,因而對細胞的正常生長沒有影響,只有當它們達到一定數量時,才最終爆發成為惡性循環。

            細胞培養過程中細胞受到污染的原因:

            1,取放細胞時引起的污染

            細胞培養過程中,取放細胞是基本的操作,培養房開關門的瞬間,環境中的微生物或多或少會進入培養箱中,而且內外溫差導致內門冷凝水的產生,極易吸附微生物,都是造成培養箱污染的風險因素。

            2,滅菌不che底造成的二次污染

            細胞培養過程中,因其它操作問題(如培養基潑灑,水盤污染等),造成培養房的大規模污染也時常會發生,此時就需要對培養箱進行滅菌消毒,常規的消毒(如紫外照射)只能達到表面消毒的效果,特別是對真菌等頑固性污染,無法進行徹di滅菌,導致后續培養過程中細胞污染頻發。


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