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          技術支持

          細胞融合實驗看這篇就夠了

          更新時間:2023-11-03   點擊次數:97次

            細胞融合(cell fusion),細胞遺傳學名詞,是在自發或人工誘導下,兩個細胞或原生質體融合形成一個雜za種細胞?;具^程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜za種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備,膜蛋白的研究。


          血清 (2).jpg

            細胞融合實驗所需試劑:

           ?。?)胎牛血清或小牛血清

           ?。?)培養基:細胞融合常用的培養液有DMEM、RPMI 1640 及無血清培養基等。DMEM有高糖(4500mg/L)及低糖(1000mg/L)之分。雜交瘤細胞在上述幾種培養基中均能良好的生長與增殖

           ?。?)HAT及HT培養液:HAT、HT以五十分之一的比例加入培養基( DMEM或RPMI 1640)

           ?。ǎ矗┚垡叶迹≒EG)溶液:稱取一定量的PEG,高壓蒸汽滅菌(8磅30分鐘),待其冷至50℃左右,與等體積的RPMI1640混合,即為50%的PEG溶液,封口后4℃放置備用。用于細胞融合的PEG的分子量可在1000-6000之間,目前已有商品化的50%PEG溶液可直接用于細胞融合。

            細胞融合的方法:

            動物細胞雜交或細胞融合

            將兩個不同種的親本細胞A和B,以滅活的仙臺病毒或聚乙二醇(PEG)為融合誘導劑,使A和B兩細胞融合成為一個具兩個遺傳性不同核的異核體(如遺傳性相同的核融合在一起叫同核體)。

            隨后異核體經有絲分裂成為兩個具有A和B兩親本的za種融合核。AB雜za種經多次分裂,B親本的染色體會逐漸減少到一個或完wan全消失。

            PEG促進細胞融合注意事項:

           ?。?)事先做好兩種原生質體融合的識別標記,如色素、缺陷型、抗性標記等。

           ?。?)原生質體或細胞密度應在105個/ml,兩種原生質體或細胞按1:1等量混合

           ?。?)PEG誘導融合的效果,同分子量大小及濃度高低密切相關。分子量和濃度愈大,促進細胞融合的能力愈高,而其粘度及對細胞的毒性也隨之增大,故通常以選用分子4000-6000濃度30-50%的PEG進行融合為宜。

           ?。?)PEG使細胞融合或致死劑量界限很狹小,為達到成功有效的融合,還必須嚴格掌握PEG的處理時間。一般加入PEG后,24℃培育10-20min(注意時間宜短不宜長,過長使原生質體周圍包裹一層膜形成凝集體,降低融合率),緩緩加入高鈣離子溶液15min后用沖洗液清洗,離心收集細胞或原生質體。

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